Inaktywacja wariantów w ANGPTL4 i ryzyko choroby niedokrwiennej naczyń wieńcowych cd

Odczyty sekwencji zostały dostosowane do ludzkiej konstrukcji odniesienia GRCh37.p13. Warianty pojedynczych nukleotydów (SNV) i warianty sekwencji insercji i delecji (indel) zidentyfikowano za pomocą zestawu narzędzi do analizy genomu 21, 22 i opatrzono adnotacją za pomocą SnpEff.23 Mutacje inaktywujące zdefiniowano jako dowolne z poniższych: SNV prowadzące do przedwczesny kodon stop, utrata kodonu start lub utrata kodonu stop; SNV lub indele zakłócające kanoniczne splicingowe akceptorowe lub dinukleotydy donorowe; i indela z przesunięciem w otwartej ramce odczytu prowadzącą do utworzenia przedwczesnego kodonu stop. Pokazano również nośniki wariantu E40K, który blokuje hamowanie LPL przez ANGPTL4,24. Wszystkie pozycje są przedstawione na podstawie sekwencji referencyjnej dla transkryptu Ensembl ENST00000301455 (sekwencja RNA informacyjnego RefSeq, NM_139314). Zastosowaliśmy sekwencjonowanie Sangera, aby potwierdzić obecność pewnych mutacji inaktywujących, szczególnie w wariantach indelowych (patrz sekcja Metody w dodatkowym dodatku). Charakterystyka przeciwciał
Neutralizujące ANGPTL4, w pełni ludzkie przeciwciało monoklonalne (REGN1001), które zastosowano w tym badaniu, uzyskano przy użyciu technologii Velocimmune Regeneron.25 Wiązanie ludzkiej immunoglobuliny REG1100 z REGN1001 i małpy ANGPTL4 zmierzono za pomocą Biacore.26. REGN1001 indukowanego przez ANGPTL4 hamowania aktywności LPL określono za pomocą testu ciągłej fluorescencji lipidowej Confluolip (Progen) .26
Hamowanie ANGPTL4 u myszy
Testowaliśmy działanie REGN1001 u samców myszy o mieszanym podłożu genetycznym (C578Bl / 6NTac dla 62,5% i 129S6 / SvEvTac dla 37,5%), które były homozygotyczne dla ludzkiego ANGPTL4 i dla niedoboru ApoE. Myszy karmiono ad libitum dietą wysokotłuszczową zachodnią (Research Diet, D12492, 60% tłuszczu na podstawie kalorii). Myszy otrzymały podskórne wstrzyknięcia REGN1001 lub przeciwciała kontrolnego o tym samym izotypie co REGN1001. Krew pobierano do pomiarów lipidów po 4-godzinnym poście. 26 Wszystkie zabiegi na zwierzętach przeprowadzono zgodnie z protokołami zatwierdzonymi przez instytucjonalny komitet ds. Opieki nad zwierzętami i ich stosowania w Regeneron Pharmaceuticals.
Monoklonalne hamowanie przeciwciał ANGPTL4 u otyłych małp
Pięć otyłych makaków rezus (masa ciała,> 5 kg, wiek,> 10 lat), które były utrzymywane na diecie wysokotłuszczowej (dieta prymasowa TAD, preparat Lab Diet 5L0P) otrzymało pojedynczy zastrzyk dożylny REGN1001 pierwszego dnia dawka 10 mg na kilogram masy ciała. Próbki surowicy zebrano w dniu 35 i oceniono pod kątem lipidów w surowicy. W odrębnym badaniu REGN1001 podawano w pojedynczej dawce dożylnej 5 mg na kilogram raz w tygodniu przez 13 tygodni samcom i samicom małp cynomolgus (10 na grupę), którzy zostali umieszczeni na diecie wysokotłuszczowej (Western Prymas Diet, 5S2T ) przed rozpoczęciem badania. Odrębna grupa kontrolna otrzymała taką samą dawkę kontroli pojazdu. Próbki krwi do pomiarów lipidów pobierano w punkcie wyjściowym oraz w 4, 8 i 14 tygodniu badania. Sześć zwierząt z każdej grupy poddano sekcji tydzień po ostatnim zastrzyku, podczas gdy pozostałe cztery zwierzęta poddano eutanazji po 15-tygodniowym okresie rekonwalescencji. Przeprowadzono sekcje podwzgórzowe w celu oceny specyficznych dla narządów efektów terapeutycznego hamowania ANGPTL4.
Analiza statystyczna
Zastosowaliśmy mieszane modele liniowe asocjacji, aby przetestować powiązania między genotypem a poziomami cholesterolu całkowitego, cholesterolu LDL, log10 cholesterolu HDL i triglicerydów log10 w modelu addytywnym (allele kodowane 0, i 2 dla homozygotów E40, heterozygoty E40 / K40 i odpowiednio homozygot K40)
[przypisy: methocel, przychodnia aksamitna rejestracja, korony pełnoceramiczne cena ]

Powiązane tematy z artykułem: korony pełnoceramiczne cena methocel przychodnia aksamitna rejestracja